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古朵生物講述:胎牛血清中蛋白組分

發布時間:2019-06-10瀏覽次數:754返回列表

胎牛血清 (Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候, 通過心臟穿刺采取胎牛血獲取的血清, 因其未與外界環境接觸,所以血清內 IgG 等免疫因子相對含量較少,適合用于免疫類細胞的培養。

1 胎牛血清與新生牛血清、小牛血清的區別簡介

1.1 分類與命名


目前國內對牛血清的分類主要依據牛出生時間和血清采制分離方法命名。1、胎牛血清:八月齡胎牛心臟穿刺取血;2、新生牛血清:出生 14 小時以內新生牛動脈采血 (又可細分為:a. 新生牛血清:采血后靜置自然析出的血清;b. 標準新生牛血清:c. 經離心分離的血清;d. 普通新生牛血清:融血或微融血的血清);3、小牛血清:出生三月齡小牛動脈采血分離血清;具體時間國內外分類大致相同但略有差異,如國外將小牛血清可以放寬至 12 個月。

1.2 組成成分

這三種類別的血清的主要組成物質,總體沒有特別明顯差別,只是有一些成分與其生存環境有關,比如,胎牛血清含有豐富的胚胎發育過程中必須的一些生長因子和激素等,絕大部分的物質來自于母體。而小牛血清中的含量則很少,小牛血清含在離開母體后自身產生的一些代謝物質,當然也包括一些生長激素。但是正是這些細微的差距在培養嬌貴細胞或要求苛刻的細胞時使得三種血清表現差距明顯。

1.3 用途

因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分zui少,所以胎牛血清是品質zui高的,常用于干細胞的培養;除了如干細胞之類的比較嬌貴的細胞,其余的大部分細胞培養,都可以用新生牛血清培養。月齡較大的小牛血清相對培養效果要差一些,常用于一些易培養的細胞或者腫瘤細胞,還可以作為封閉液、保護液、緩沖液使用。使用內蒙古金源康公司的胎?;蛘咝律Q鍖? BHK-21/Vero/Marc145/ST/PK-15 等多種細胞進行連續傳代培養時,胎牛血清以及新生牛血清均有較好的促細胞生長的效果,胎牛血清和新生牛血清對群體性細胞培養時效果差別不明顯,但是對單細胞克隆培養時胎牛血清優于新生牛血清。

2 蛋白組成成分區別

2.1 血清蛋白組成

一說起胎牛血清與新生牛血清的差異時,大家基本都會提到促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組份與比例不同,這些物質比較籠統,且與牛源地、生存環境、營養狀況等有一定,研究其差異性比較困難。但是有一點可以肯定,胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別,其中zui主要的就是球蛋白的含量有差距。先讓我們一起了解血清中蛋白組成:


圖 1:牛血清蛋白電泳圖及光密度掃描圖

電泳時從正極到負極為清蛋白,α球蛋白,β-球蛋白及γ-球蛋白。α球蛋白包括α1-球蛋白,α2-球蛋白,β包括β1-球蛋白和β2-球蛋白。α1-球蛋白:主要是α1 抗胰蛋白酶和α1 酸性糖蛋白。α1 抗胰蛋白酶是具有蛋白酶抑制作用的一種急性時相反應蛋白,α2-球蛋白主要為結合珠蛋白和α2-巨球蛋白。β-球蛋白:以β脂蛋白、轉鐵蛋白和血紅素結合蛋白為主,還包括補體成分。γ-球蛋白主要成分為 IgG,此外還包括 IgM;IgA;IgD;IgE 等。

2.1 牛血清蛋白含量差異

胎牛血清與新生牛血清在蛋白組成上的差異還是很明顯的。首先,根據內蒙古金源康生物工程有限公司多年檢測經驗總結,胎牛血清總蛋白含量(g/dl)約為 2%-4%,新生牛血清約為 3.0%-5.0%,成牛血清則高達 8%-10%.從蛋白含量上也可以初步判斷一個血清是否為胎?;蛐律Q?,蛋白含量越高說明牛齡越大,目前檢測蛋白含量是內蒙古金源康生物工程有限公司生產時初步檢測一項重要指標。

其次,球蛋白尤其是免疫球蛋白的含量是影響胎牛血清與新生牛血清的使用效果的zui主要因素。白蛋白是血清中的重要功能蛋白,是血清中有益于細胞培養的重要成分;免疫球蛋白對細胞培養有一定的抑制作用,其在血清中的含量越少越好,通過白蛋白與免疫球蛋白的比值可以判斷血清的優劣。

在成年動物的體液中, 免疫球蛋白含量zui高的是血清。而正如已經知道的那樣, 母源免疫球蛋白不能通過牛的胎盤屏障, 所以胎牛血清中沒有 Ig,小牛從初乳中獲得免疫球蛋白。正是考慮到這一點,新生牛血清來源于未進食的新生牛,zui大限度的減少免疫球蛋白的產生。但是母牛有諸如病毒等傳染因子進入時,例如腹瀉病毒等感染胎牛,胎牛血清中可發現免疫球蛋白,所以胎牛血清不一定完全不含免疫球蛋白。


圖 2:成牛血清與成人血清蛋白含量差異

從圖 2 成牛血清與成人血清蛋白組份組成表可以看出,血清中球蛋白含量是很高的,其中γ-球蛋白含量較α球蛋白、β-球蛋白都要高。IgG 又是γ-球蛋白的主要成分,因此檢測 IgG 含量是判斷是否為胎牛血清的一項重要指標,胎牛血清一般 IgG≤5ug/ml。

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